Salmonella’da strese yanıt gen ifadelerinin elektroforetik tiplendirilmesi
Yükleniyor...
Dosyalar
Tarih
2012
Yazarlar
Dergi Başlığı
Dergi ISSN
Cilt Başlığı
Yayıncı
Trakya Üniversitesi Tıp Fakültesi
Erişim Hakkı
info:eu-repo/semantics/openAccess
Özet
Çalışmada Salmonella enteritidis için standart suş (ATCC 13076) ve hastadan izole edilen sekiz suş toplam dokuz suşda ampisilin ve siprofloksasine karşı stres yanıtı araştırıldı. Metodoloji olarak önce iki optimizasyon çalışması yapıldı. Birincide, yanıt sonrası dış membrandan izole edilecek proteinler için ekstraksiyon yöntemi geliştirildi. Bakterilerin asetonla muamele sonrası Triton X-100 ve N-Lauryl sarkosin’li Tris tampon içinde ektraksiyonunun uygun olduğu bulundu. İkincide, stres sağlayan uygun antibiyotik konsantrasyonu ve maruziyet süresi belirlendi. Sıvı besiyerinde çoğalan bakterilerin sayısıyla orantılı minimum inhibitör konsantrasyonunda antibiyotiğe 5 saat maruziyetin uygun olduğu bulundu. Deney aşamasında suşlara uygun antibiyotik stresi uygulandı, proteinler izole edildi ve %12’lik sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jelde koşturuldu. Elde edilen strese yanıt bantları, bakteri genom bilgisi kullanılarak protein düzeyinde tahmin edildi. Biyoinformatik analiz sonucu stres yanıtıyla ilgili olabilecek 43 adet protein saptandı. Bunların %59’nın membran tamiri ve transportunda; %26’nun direnç, stres ve virülans yönetiminde rol aldığı tespit edildi. Siprofloksasine yanıt olarak LamB porin ifadesinin,ampisiline yanıt olarak Ferrioksamin B reseptör öncüsü ve invH ve/veya rscF gen ürün ifadelerinin seçici arttığı gösterildi.Bu çalışmanın sonuçları pratikte uygulanabilirlik açısından ümit vaad edicidir. Çünkü,antibiyotiğe karşı savunmaya geçerek adaptasyon veya direnç geliştirmeye çalışan bakteride aktiflenen stres genlerini inhibe edecek drug tasarımı önermektedir. Bu yönde ilerleyecek çalışmalar antibiyotiklerle kombine tedavi için yeni ilaç üretimine yol açabilir ve sağlık problemleri nedeniyle uygun dozda antibiyotik verilemeyen hastaların tedavisi için kullanılabilir. Bu tip ilaçlar bakterinin sadece etkinliğini azaltmakla kalmayacak, düşük doz 62 antibiyotik kullanımını mümkün kılacak ve belki dirençli suşlarda dirençli olunan antibiyotiğin kullanımını sağlayacak değerdedir. Anahtar kelimeler: Salmonella enteritidis, antibiyotik stresi, proteomik analiz
Açıklama
Tıpta Uzmanlık Tezi
Anahtar Kelimeler
Salmonella Enteritidis, Antibiyotik Stresi, Proteomik Analiz, Stres Against Antibiotics, Proteomics Analysis
