Yazar "Tetiker, Aylin Türksever" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 1 / 1
  • Küçük Resim Yok
    Öğe
    Farklı kaynaklardan izole edilen üreaz enziminin immobilizasyonu ve üre tayininde ve hidrolizinde uygulanabilirliğinin araştırılması
    (Trakya Üniversitesi, 2016) Tetiker, Aylin Türksever; Ertan, Figen
    Bu tez çalışmasında üç farklı kaynaktan izole edilen üreaz enzimi aljinata immobilize edilerek hayvan yemlerinde üre tayininde kullanıldı. Kaynak olarak yüksek üreaz aktivitesinde sahip bitki, fungus ve bakteri türleri kullanıldı. Üreaz aktivitesi Nessler metoduna göre ölçüldü. Bitki kaynağı, bir nohut çeşidi olan Cicer arietinum, fungus kaynağı Aspergillus fumigatus, bakteri kaynağı ise Proteus mirabilis olarak belirlendi. Bitki, fungus ve bakteri kaynaklarının her üçü için de süre, sıcaklık, termal kararlılık, optimum pH, pH kararlılığı, substrat konsantrasyonu, yüklenen enzim miktarı, aljinat konsantrasyonu, tekrar kullanılabilirlik, depo kararlılığı gibi çeşitli parametreler araştırılarak bu bulgular serbest enzim ile karşılaştırıldı. Protein tayinleri Bradford yöntemi kullanılarak gerçekleştirildi. İmmobilize üreaz enzimleri içeriği farklı olan hayvan yemlerinde üre tayininde kullanıldı. Cicer arietinum üreazı ile yapılan çalışmalarda immobilizasyon verimi % 88.5 olarak belirlendi. Optimum süre 40 dakika, optimum sıcaklık ve pH değerlerinin her iki enzim formu için de benzer olduğu, immobilizasyonun enzimin sıcaklık ve pH istemini değiştirmediği gözlendi. Optimum sıcaklık ve pH sırasıyla 50 °C ve 7.0 olarak bulundu. İmmobilizasyonun enzimin termal ve pH kararlılığını iyi yönde etkilediği saptandı. Optimum immobilizasyon koşullarında hazırlanan boncuklar 5 tekrar kullanım sonunda ilk aktivitelerinin yaklaşık % 60'ını korudu. Depolama kararlılığı çalışması sonucunda serbest enzim 4. günde aktivitesinin tamamına yakınını kaybederken immobilize enzimin aktivitesinin % 88'ini korudu. Serbest ve immobilize üreazın Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0.42 mM ile 5 U mL-1 dk-1 ve 1.33 mM ile 10 U mL-1 dk-1 olarak bulundu. Aspergillus fumigatus ile yapılan optimizasyon çalışmalarının sonucunda immobilizasyon veriminin % 82.5 olduğu bulundu. Optimum süre 30 dakika, optimum sıcaklık 40 °C, optimum pH 7.0 olarak bulundu. Fungus üreazı immobilizasyon sonrasında termal ve pH kararlılığını serbest enzime göre daha iyi korudu. Tekrar kullanılabilirlik çalışmasında immobilize üreazın 5 döngü sonunda aktivitesinin % 44'ünü koruduğu gözlendi. Depo kararlılığı çalışmasında serbest enzim 7. günün sonunda aktivitesinin sadece % 18'ini korurken immobilize enzim % 66'sını korudu. Serbest üreaz ve aljinat boncuklarda tutuklanan üreazın Km ve Vmax kinetik sabitleri sırasıyla 1 mM ile 8.33 U/ mL-1 dk-1 ve 0.44 mM ile 4.16 U/ mL-1 dk-1 dak olarak bulundu. Proteus mirabilis ile gerçekleştirilen optimizasyon çalışmalarının sonucunda immobilizasyon verimi % 85 olarak hesaplandı. Optimum pH her iki enzim formu için 7.0 olarak bulundu. pH 7.0 ve 8.0'de serbest ve immobilize üreaz benzer şekilde kararlılıklarını korudular. Optimum sıcaklık serbest ve immobilize üreazlar için 40 °C olarak belirlendi. İmmobilize enzimin termal stabilitesi serbest enzime göre daha iyi bulundu. Tekrar kullanılabilirlik çalışmasında, immobilize enzimin 12 kullanım sonunda aktivitesinin % 55'ini hala koruduğu bulundu. Serbest enzimin depolama kararlılığı çalışmasında 10. günde aktivitesinin tamamına yakınını kaybederken immobilize üreaz ise % 53'ünü koruduğu gözlendi. Serbest ve immobilize enzimlerin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 2 mM, 40 U/ mL-1 dk-1 ve 0.4 mM, 35 U/ mL-1 dk-1 olarak hesaplandı. Hayvan yemlerinde üre miktarını belirlemek amacıyla içeriği bilinen yemlerde immobilize bitki, fungus ve bakteri üreazları ile üre tayini yapılarak bulgular karşılaştırıldı. Çalışmanın sonucunda immobilize üreazlar ile hayvan yemlerinde üre tayin edilebileceği sonucuna varıldı. Son olarak immobilize üreazların üre hidrolizinde kullanılabilirliği araştırıldı. Anahtar Kelimeler : İmmobilizasyon, üreaz, aljinat, üre tayini, Cicer arietinum, Aspergillus fumigatus, Proteus mirabilis.