Yazar "Kocatürk, Selin" seçeneğine göre listele

Listeleniyor 1 - 1 / 1
  • Küçük Resim
    Öğe
    Enginar polifenol oksidazının alginat ve karragenan jellerde immobilizasyonu ve bazı biyokimyasal özelliklerinin incelenmesi
    (Trakya Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, 2008) Kocatürk, Selin; Yağar, Hülya
    Bu çalışmada; enginardan (Cynara scolymus) izole edilen polifenol oksidaz (EC.1.14.18.1) alginat, karragenan ve alginat + karragenan jellere immobilize edildi. Elde edilen immobilize enzimlerin optimum pH ve sıcaklık, Km ve Vmax kinetik sabitleri, termal ve operasyonel kararlılık, yeniden kullanılabilirlik ve depo kararlılığı gibi bazı biyokimyasal özellikleri belirlendi ve serbest enziminkiyle karşılaştırıldı. Antalya Gaziosmanpaşa'dan sağlanan taze enginarların baş kısmından polifenol oksidaz enzimi Tris - HCl tamponu (pH 7.0) varlığında izole edildi, sonrasında % 10-90 'lık (NH4)2SO4 çöktürmesi ve dializ uygulandı. Dializ işlemi +4 oC 'de 1 gün boyunca aynı tampona karşı gerçekleştirildi. Elde edilen dializat enzim kaynağı olarak kullanıldı. Enginar polifenol oksidazı alginat, karragenan ve alginat + karragenan jellerde tutuklandı. Damlatma çözeltisi olarak alginat jeller için CuCl2 ve karragenan jeller için KCl kullanıldı. Protein tayinleri Lowry yöntemi uygulanarak gerçekleştirildi. İmmobilizasyon yüzdeleri alginat boncuklar için % 70, alginat + karragenan boncuklar için % 60 ve karragenan boncuklar için % 37 olarak belirlendi. En yüksek kateşolaz aktivitesi alginat jelde gözlenirken (370 U/gr boncuk dak) en yüksek krezolaz aktivitesi ise alginat+karragenan jelde gözlendi (90 U/gr boncuk dak). Cu - alginat boncuklarda enginar polifenol oksidazının immobilizasyon koşullarının optimizasyonunda; optimum alginat konsantrasyonu % 3, CuCl2 konsantrasyonu % 2, optimum yüklenen enzim miktarı 1/5 D, optimum boncuk boyutu 3 mm ve optimum boncuk miktarı 0.1 gr olarak belirlendi. Alginat ve alginat + karragenan jellerde tutuklanan enginar polifenol oksidazı için; kateşolaz aktivitesinde serbest enzim ve immobilize formlar için optimum pH değeri 7.0, krezolaz aktivitesi için ise 4.0 olarak bulundu. Alginatta tutuklanmış enzim için kateşolaz aktivitesinin optimum sıcaklığı 70 ? C, alginat + karragenanda tutuklanmış enzim için 40 ? C, serbest enzim için ise 5 ? C olarak belirlendi. Alginat boncuklardaki immobilize enzimin krezolaz aktivitesi için en iyi sıcaklık 30 oC olarak, alginat + karragenan boncuklar için ise 20 oC, serbest enzim için ise optiumum sıcaklık değeri 50 oC olarak bulundu. İmmobilize enginar polifenol oksidazının varolan termal kararlığını tutuklama sonrasında da büyük oranda koruduğu gözlendi. Serbest enzim ve alginat boncuklarda tutuklanan enzimin krezolaz aktivitesine ait Km ve Vmax kinetik sabitleri sırasıyla, 1.58 x 10-3 mM ile 142.85 U/mLdak ve 1.92 x 10-3 mM ile 99 U/mLdak, alginat + karragenan boncuklarda 5.0 x 10-3 mM ile 111.1 U/mLdak olarak bulundu. Kateşolaz aktivitesinde Km ve Vmax kinetik sabitleri sırasıyla, 2.32 x 10-3 mM ile 1613 U/mLdak ve 6.66 x 10-3 mM ile 1000 U/mLdak, alginat+karragenan boncuklarda 8.0 x 10-3 mM ile 1282 U/mLdak olarak tespit edildi. Yeniden kullanılabilirlik çalışmasında; alginat ve alginat + karragenan boncukların 8 döngü süresince her iki aktivitesinin yaklaşık tamamını koruduğu gözlendi. Depolama kararlılığı çalışmasında serbest enzim aktivitesini yaklaşık 7 - 9 gün korurken immobilize formlar aktivitelerini yaklaşık 30 gün boyunca koruduğu gözlendi.