Akrilamidin insan kaynaklı hepatoma hücrelerinde protein yıkım yolları üzerine etkileri
Özet
Proteinlerin sentezinin, katlanmasının, taşınmasının ve yıkımlarının kontrolü
proteostazın sürdürülmesi için şarttır. Hücre içi protein yıkımı ubikitin-proteazom sistemi ve
otofaji sistemi tarafından gerçekleştirilmektedir. Mikrotübül-ilişkili protein 1A/1B-hafif zincir
3B protein otofaji markırlarından biridir ve fosfatidiletanolamin ile konjuge olarak
mikrotübül-ilişkili protein 1A/1B-hafif zincir 3B-II olarak adlandırılan formda otofagazom
yapısına girer. Isı şok proteini 70; proteinlerin katlanma, disagregasyonunda ve yıkımında rol
oynayan önemli bir şaperondur. Literatürde karaciğerde akrilamidin ısı şok proteini 70
düzeylerine, ubiquitin-proteazom sistemine veya otofajiye etkisini araştıran bir çalışmaya
rastlamadık. Bu çalışmada, insan kaynaklı hepatoma hücrelerinde akrilamidin protein yıkım
yolları üzerine etkilerini araştırmayı amaçladık.
Akrilamidin etkisinin araştırılması amacıyla HepG2 hücreleri 24 saat boyunca 10
1
,
10
2
, 10
3
ve 10
4
µM konsantrasyonlarda akrilamid ile inkübe edildi. Hücre canlılığı 3-(4,5Dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazolium
bromür
testi
ile
değerlendirildi.
Isı
şok
proteini
70,
ubikitinlenmiş protein ve mikrotübül-ilişkili protein 1A/1B-hafif zincir 3B-II protein
düzeyleri western blot yöntemiyle ölçüldü.
Akrilamid, 10
2
, 10
3
ve 10
4
µM konsantrasyonlarda hücre canlılığını anlamlı olarak
azalttı. 10
4
µM akrilamid; ısı şok proteini 70, ubikitinlenmiş protein ve mikrotübül-ilişkili
protein 1A/1B-hafif zincir 3B-II protein düzeylerinde anlamlı azalmaya yol açtı.
Sonuç olarak, çalışmamız akrilamidin HepG2 hücrelerinde; hücre canlılığını
azalttığını, ısı şok proteini 70, ubikitinlenmiş protein ve mikrotübül-ilişkili protein 1A/1Bhafif
zincir 3B protein düzeylerini arttırdığını gösterdi. Bu çalışma ile insan kaynaklı
hepatoma hücrelerinde akrilamidin özellikle yüksek konsantrasyonlarda protein yıkım
yollarının çalışmasını bozduğu gösterilmiştir. The control of synthesis, folding, transporting and degradation of proteins is essential
for maintaining proteostasis. The degradation of intracellular proteins are performed by
ubiquitin-proteasome system and autophagy. Microtubule-associated protein 1A/1B light
chain 3B is an autophagy marker and enters to autophagasome structure by its conjugated
form with phosphatidylethanolamine which is called as microtubule-associated protein 1A/1B
light chain 3-II. Heat shock protein 70 is an important chaperone which plays role on the
folding, dissagregation and degradation of proteins. In literature, we did not encounter any
study which investigates the effect of acrylamide on heat shock protein 70 levels, ubiquitinproteasome
system
or
autophagy
in
liver.
In
present
study,
we
aimed
to
investigate
the
effect
of
acrylamide
on protein
degradation
pathways
in human-derived
hepatoma
cells.
In order to investigate the effects of acrylamide, HepG2 cells were incubated with
acrylamide at 10
2
, 10
3
ve 10
4
µM concentrations for 24 hours. Cell viability was evaluated by
3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay. Heat shock protein
70, ubiquitinated protein and microtubule-associated protein 1A/1B light chain 3B protein
levels were measured by western blotting. Acrylamide at 10
2
, 10
3
ve 10
4
µM concentrations
significantly decreased cell viability. 10
4
µM acrylamide caused a significant increase on heat
shock protein 70, ubiquitinated protein and microtubule-associated protein 1A/1B light chain
3B-II protein levels.
As a result, our study showed that acrylamide decreases cell viability and increases
heat shock protein 70, ubiquitinated protein and microtubule-associated protein 1A/1B
lightchain 3B-II protein levels in HepG2 cells. With the present study, it has been shown that
acrylamide, especially at high concentrations, disrupts protein degradation pathways in
human-derived hepatoma cells.
Koleksiyonlar
- Tez Koleksiyonu [574]